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蛋白酶K的妙用
编辑:宁波美成生物科技有限公司   时间:2017-03-20

蛋白酶K,威力巨大的广谱蛋白酶,95C 加热10 分钟,则完全失活。数年前首次使用它,是替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头,效果不错;后来又用于处理 RNase-Free的水,效果也是一级棒。从此就再也不用 DEPC 了。现在将它的细节公开,与大家分享。 配制 RNA 裂解试剂时,直接用灭菌的双蒸水配制,最后,加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀,室温放置 15 分钟后即可。枪头及离心管去除 RNase:先将枪头及离心管清洗干净后,移入预先混好的含 1ug/ml 蛋白酶 K 的双蒸水,彻底浸入。室温放置 30 分钟后,连水一起高压灭菌。弃水后,烘干即可。RNase-Free 水的获得:直接在灭菌的双蒸馏水中加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀,室温放置 15 分钟后,灭菌处理即可。该蛋白质的残留对后续实验没有可见的影响。无蛋白质残留的RNase-Free 水的获得:这比较麻烦。直接在灭菌的双蒸馏水中加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀后,倒入专用的蒸馏器中。放置 15 分钟后,加热蒸馏,流出的就是无蛋白质残留的RNase-Free 水。要提醒的是,该专用蒸馏器头几次流出来的水,只能当普通蒸馏水用,因为通道中难确保 RNase-Free 的环境;另外,一定要主要密闭性,否则,流出的水又被污染了。 

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